Funktionelle Analyse von komplexen Hepatitis-B-Virus-Varianten, assoziiert mit Leberzirrhose bei Immunsupprimierten

Item Type:	Thesis
Title:	Funktionelle Analyse von komplexen Hepatitis-B-Virus-Varianten, assoziiert mit Leberzirrhose bei Immunsupprimierten
Creators Name:	Maerschenz, S.
Abstract:	Obwohl der Wildtyp des Hepatitis-B-Virus (HBV) nicht zytopathogen und die Pathogenese der Hepatitis B generell immunvermittelt ist, koennen in immunsupprimierten Nierentransplantatempfaengern mit chronischer Hepatitis B schwere Leberschaeden bis hin zu Leberzirrhose und Leberversagen entstehen. Die Entwicklung von Leberzirrhose in den Nierentransplantierten ist assoziiert mit der Akkumulation und Persistenz von komplexen HBV-Varianten mit Mutationen im Core-Promotor / X-Gen, Deletionen im Core (C)-Gen und teilweise zusaetzlichen Deletionen im praeS-Bereich. Dies laesst eine Rolle der Varianten in der speziellen Pathogenese bei Immunsupprimierten vermuten. In der vorliegenden Arbeit wurden funktionelle Analysen der komplexen Varianten im Vergleich zu Referenz-Wildtypgenomen und Wildtyp-aehnlichen Genomen der Patienten aus der fruehen Infektionsphase durchgefuehrt, um Hinweise auf den potentiellen Beitrag der Varianten zur Pathogenese zu erlangen. Die Analysen erfolgten durch transiente Transfektion der humanen Hepatomazelllinie HuH7 mit repraesentativen HBV-Gesamtgenomen, die aus 2 Patienten waehrend des Krankheitsverlaufs von einer asymptomatischen Infektion hin zur Leberzirrhose isoliert und kloniert worden waren. Trotz einiger Unterschiede im Detail wiesen die komplexen Varianten einen gemeinsamen, drastisch vom Wildtyp abweichenden Phaenotyp auf. Dieser war gekennzeichnet durch eine veraenderte Transkription mit reduzierten praeC- und Oberflaechen-mRNAs und verstaerkter Expression der praegenomischen RNA, eine starke Reduktion des haeufigsten Spleissprodukts der praegenomischen RNA, SP1, eine extrem reduzierte oder fehlende Expression und/oder Sekretion aller Oberflaechenproteine und des HBeAg, ein veraendertes intrazellulaeres Verteilungsmuster des schwach exprimierten Core-Proteins und teilweise der Oberflaechenproteine sowie eine erhoehte Replikation und Anreicherung gegenueber Wildtyp-HBV aufgrund einer verstaerkten reversen Transkription der praegenomischen RNA. Dieser Phaenotyp basierte zum Teil auf den Mutationen in Core-Promotor und C-Gen, wurde jedoch deutlich durch zusaetzliche Mutationen in den uebrigen Genomabschnitten beeinflusst. Die vielfaeltigen Veraenderungen der Varianten unterstuetzen ihren vermuteten Beitrag zur Pathogenese. [Although wild-type hepatitis B virus is not cytopathogenic and the pathogenesis of hepatitis B is generally immune mediated, also immuno-suppressed patients, such as renal transplant recipients, with chronic hepatitis B may develop liver cirrhosis and end-stage liver disease. In renal transplant recipients, the development of liver cirrhosis is associated with the accumulation and persistence of complex HBV variants with mutations in core promoter / X gene, deletions in core (C) gene and sometimes additional deletions in the preS region. This suggests a role of these variants in the special pathogenesis in immuno-suppressed patients. In the present work, the complex variants were functionally analyzed in comparison to reference wild-type genomes and wild-type-like HBV genomes from the early asymptomatic phase of infection. For the analyses, representative cloned full-length HBV genomes isolated from 2 patients before and during liver cirrhosis were transiently transfected into the human hepatoma cell line HuH7. In spite of some variations, the complex variants showed a common phenotype, which was drastically altered compared to wild-type. It was characterized by reduced preC and surface mRNAs and increased expression of pregenomic RNA, by a strong reduction of the major spliced pregenomic RNA, SP1, by a partial or complete defect in expression and/or secretion of surface proteins and HBeAg, by an aberrant intracellular localization of the weakly expressed core protein and in some cases of the surface proteins, and by an enhanced replication and enrichment over wild-type HBV due to an enhanced reverse transcription of variant pregenomic RNA. The phenotypic alterations were often based on the mutations in core promoter and C gene but were considerably influenced by the additional mutations in other genomic regions. The multiple functional changes of the variants support their assumed contribution to pathogenesis.]
Keywords:	Hepatitis B Virus (HBV), Hepatitis B virus (HBV), Varianten, Variants, funktionelle Analyse, Functional analysis, Phaenotyp, Phenotype, Hepatomazelllinie, Hepatoma cell line, Transfektion, Transfection, Leberzirrhose, Liver cirrhosis, Nierentransplantatempfaenger, Renal transplant recipients, immunsupprimiert, Immuno-suppressed, Pathogenese, Pathogenesis
Publisher:	Humboldt-Universitaet zu Berlin
Number of Pages:	172
Date:	6 October 2006
Official Publication:	http://edoc.hu-berlin.de/docviews/abstract.php?lang=ger&id=27564

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