Nachweis der Telomeraseaktivitaet in Zellkulturen mittels eines faseroptischen Sensors

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Item Type:	Article
Title:	Nachweis der Telomeraseaktivitaet in Zellkulturen mittels eines faseroptischen Sensors
Creators Name:	Schmidt, P.M., Matthes, E., Scheller, F.W. and Bier, F.F.
Abstract:	Es wurde ein sensorischer Bioassay entwickelt, mit dessen Hilfe die Aktivitaet des Enzyms Telomerase direkt und online gemessen werden kann. Die Aktivitaet von Telomerase wird als Tumormarker angesehen. Der sensorischer Ansatz bietet die Moeglichkeit, direkt aus Zellextrakt ohne Auffreinigungsschritte die Aktivitaet des Enzyms Telomerase on-line zu bestimmen. Aufbauend auf den Ergebnissen des Genosensors, werden auf der Oberflaeche eines optischen Biosensors Oligonukleotide kovalent immobilisiert. Dieser "Rezeptor" fuer Polymerasen soll gleichzeitig auch als Startpunkt füuer die Polymeraseaktivitaet dienen. Aufgrund dieses Aufbaus soll der Einsatz ungelabelter Enyzme und Subtrate moeglich gemacht werden. Da die Telomerase als Polymerase selbst eine Verstaerkung des Signals bewirkt, wird der Einsatz einer enzymatischen Verstaerkung durch die Polymerasekettenreaktion (PCR) ueberfluessig. Im Zellextrakt von HL60-Zellen wurde die Telomeraseaktivitaet mit Hilfe des etablierten Verfahrens (TRAP-ezeTM) bestimmt und eingestellt. Phosphothioat-modifzierte Oligonukleotide zur Verstaerkung der Bindung und damit der Effizienz der Synthese konnten auch auf der Oberflaeche gezeigt werden. Die Online-Detektion der Aktivitaet der Telomerase wurde erfolgreich durchgefuehrt, sowohl mit labelfreien Messungen als auch mit fluoreszenzmarkierten Sonden. Dabei gelang es auch, Sekundaerstrukturen der synthetisierten Telomere durch Erhoehung der Reaktionstemperatur aufzuschmelzen und ueber Kontrollhybridisierung nachzuweisen. Es wurde belegt, dass die in einem Zellextrakt beobachete Polymerase-Aktivitaet der Telomerase eindeutig zuzuordnen ist. Durch fluoreszenzmarkierte Sonden wird die Empfindlichkeit des Nachweises deutlich erhoeht. Damit wurde die Telomeraseaktivität erstmals auf Oberflaechen-gekoppelten DNA-Oligomer-Templates beobachtet.
Source:	Sensorik
Page Range:	51-55
Date:	2001

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